كروماتوگرافي |
يكي از ملزومات پيشرفت در تشخيص و درمان در سه دهه ي گذشته توسعه تكنيك ها، روش هاي جداسازي و تخليص ماكرومولكولهاي حياتي)نظير پروتئينها و اسيدهاي نوكلئيك( است. يكي از تكنيكهاي عمده اي كه براي استخراج و تخليص اين ماكرومولكول هاي حياتي كاربرد زيادي دارد،كروماتوگرافي است. كروماتوگرافيchromatography ، در زبان يوناني chroma يعني رنگ و grophein يعني نوشتن است. كروماتوگرافي كاربردهاي زيادي در تمام شاخه هاي علوم و علوم پزشكي دارد و گروه متنوعي از روشهاي جداسازي مواد را شامل مي شود كه بسياري از اين جداسازي ها به روش هاي ديگر ناممكن است. اولين روشهاي كروماتوگرافي در سال 1903 بوسيله ميخائيل سوئت ابداع و نامگذاري شد كه او از اين روش براي جداسازي مواد رنگي استفاده كرد. مارتين و سينج در سال 1952 به پاس اكتشافاتشان در زمينه كروماتوگرافي جايزه نوبل را دريافت كردند. مهمترين پيشرفتي كه از سال 1966 در كروماتوگرافي ايجاد شد ابداع روش كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا HPLC( High Performance Liquid Chromatography))) ميباشد. اين روش نسبتاً جديد است و تحقيقات مربوط به آن به سال هاي 1970 و بعد از آن بر مي گردد. HPLC يكي از روشهاي ظريف كروماتوگرافي امروزي مي باشد كه با استفاده از پمپ هاي فشار بالا (كه سرعت حركت مولكولها را افزايش ميدهد) به انجام مي رسد. همچنين مواد به كار رفته در HPLC داراي كيفيت بالايي بوده كه مي توانند در برابر نيروي فشارنده جريان مقاومت نمايند. با كاهش زمان عبور از ستون، HPLC ميتواند از طريق محدود نمودن توزيع انتشاري، قدرت تفكيك را به ميزان زيادي افزايش دهد. با پيشرفتهاي بسيار زياد در زمينه دستگاه هاي HPLC امروزه نسل جديد اين دستگاه ها با عنوان كروماتوگرافي مايع با كارايي فوق العاده بالاUHPLC(Ultra High Performance Liquid Chromatography) بوجود آمده است. دستگاه UHPLC مدلShimadzu Nexera X2 در ميان تمامي انواع مدلهاي UHPLC، پيشرفته ترين و مجهزترين سيستم HPLC مي باشد. اين دستگاه با پمپ با فشار فوق العاده بالا (تا 130Mpa) طراحي شده است كه باعث ميشود كمترين اختلال و حجم از دست رفته در سيستم ايجاد شده و آناليز با سرعت بسيار بالا و تفكيك با كيفيت عالي انجام گيرد. همچنين اين پمپ باعث ميگردد پالس هاي اضافي به طور معني داري كاهش يافته و به كمترين حد خود برسد كه اين كاهش پالس دستيابي به آناليز با حساسيت فوق العاده بالا را فراهم مي نمايد. همچنين در اين مدل UHPLC اتوسمپلري طراحي شده است كه تكرارپذيري وپايداري بينظيري را ايجاد ميكند. محدوده ظرفيت تزريق اين اتوسمپلر به ستون جداسازي دستگاه از حجم 1µl تا 2000µl متغير ميباشد كه در چنين سيستم هايي، تزريق با اين حجم بسيار ناچيز و فوق العاده كم تا حجم بالا يك نوآوري مافوق عالي ميباشد. همچنين اين اتوسمپلر مجهز به يك سيستم خنك كننده نمونه بوده كه توانايي كنترل دماي نمونه را در محدوده بين 4 تا 40 درجه سانتيگراد دارا مي باشد كه اين ويژگي براي انجام آناليز متوالي كه بايستي نمونه در شرايط سرد و قابل قبول بوده و امكان از بين رفتن آن در دماي محيط و اتاق وجود دارد بسيار حائز اهميت است. از سوي ديگر Shimadzu Column Oven در اين دستگاه UHPLC براي فراهم نمودن دماي مورد نظر ستون كروماتوگرافي و جريانهاي خطي در يك دماي ثابت كه آناليز با قابليت انجام مجدد و جداسازي با كيفيت بالا را فراهم ميكند، وجود دارد. دتكتورهاي متعددي جهت اين دستگاه وجود دارد كه از جمله اين دتكتورها، دتكتور UV و RF مي باشد كه دتكتور RF يك Spectrofluorometric بوده و قابليت اندازه گيري به روش هاي تك طول موجي، دو طول موجي، Spectrum Scanning و... را دارا مي باشد. دتكتور UV آن يك دتكتور Ultra-Violet Visible Spectrophotometric ميباشد كه از يك لامپ دوتريومي بعنوان منبع نوري خود استفاده ميكند كه بهترين دتكتور براي آناليز مواد در ناحيه فرابنفش ميباشد. اين دتكتور نيز داراي روش هاي اندازه گيري همانند تك طول موجي، دو طول موجي، Wavelength Scanning مي باشد. |
1395/10/18 |